به گزارش پارسینه ، همایون ارشادی تا مقطع دبیرستان در آبادان درس خواند. پس از دیپلم به ایتالیا رفت و در دانشگاه ایتالیا معماری خواند و یازده سال بعد به ایران بازگشت. ارشادی در سال 1375 توسط عباس کیارستمی به سینما معرفی شد.

در کتاب سر کلاس با کیارستمی پال کرونین به نقل از عباس کیارستمی گفته شده که با هم آشنا می شوند و بعد از گذشت شش ماه در فیلم طعم گیلاس انتخاب می شود و به عنوان نقش اول فیلم بازی کند.
طعم گیلاس جایزهٔ نخل طلا جشنواره فیلم کن را در سال 1997 به دست آورد و بازی وی نیز مورد توجه قرار گرفت. ارشادی در سال 1376 در فیلم درخت گلابی جلوی دوربین داریوش مهرجویی رفت و بار دیگر بازی او مورد توجه قرار گرفت. او در فیلم ملکه در سال 1390 به کارگردانی محمدعلی باشه آهنگر در نقش متفاوتی بدون دیالوگ ظاهر شد.

ارشادی در سال 2007 در بادبادک باز ساخته مارک فورستر ایفای نقش کرد. بادبادک باز اولین تجربه بین المللی و هالیوودی ارشادی بود؛ که تجربه موفقی برای وی به حساب آمد و نقش آفرینی او نیز مورد توجه منتقدان و عموم قرار گرفت. از نظر منتقدان و کارگردان فیلم بادبادک باز نقش آفرینی همایون ارشادی حیرت انگیز بود.
همچنین روزنامه لس آنجلس تایمز در 18 دسامبر نوشت: مارک فورستر نکته حیرت انگیز را در نقش آفرینی همایون ارشادی، بادبادک باز طبیعی بودن او می داند. خیلی از بازیگران به تکنیک خود تکیه می کنند، اما او تنها به دل خود متکی است. ارشادی در سال 2009 با نقش آسپاسیوس در فیلم آگورا به کارگردانی آلخاندرو آمنابار حضور یافت و بیش از پیش به اعتبار خود افزود.
وی در فیلم سی دقیقه پس از نیمه شب 2012 ساخته کاترین بیگلو حضور کوتاهی داشت. ارشادی در سال 2014 به پروژه تحت تعقیب ترین مرد به کارگردانی آنتون کوربن پیوست و در کنار فیلیپ سیمور هافمن، ریچل مک آدامز و ویلم دفو در کارکتر دکتر عبدالله به ایفای نقش پرداخت. ارشادی همچنین در سال 2016 در فیلمی عاشقانه به نام علی و نینو ساخت کشور انگلیس نقش آفرینی کرده است.